Короновирус и инфекционный перитонит кошек.

Первое сообщение в теме :

Есть такие болезни, о которых не хочется думать, но эта угроза висит в воздухе и не дает спокойно спать заводчикам во всем мире.
Инфекционный перитонит кошек.
Ниже вся информация, наиболее здравомыслящая на этот счет.
У кого что есть - делитесь.

Лечение и профилактика кошачьего инфекционного перитонита.
©Arnold Plotnick MS, DVM, ACVIM, ABVP

Лечение кошачьего инфекционного перитонита.
Кошачий инфекционный перитонит (Feline Infectious Peritonitis, FIP) - заболевание прогрессирующее и неизлечимое, смертельное. Кошки, как правило, поддаются болезни довольно быстро, в течение нескольких дней или недель. Мокрые формы болезни прогрессируют быстрее, чем сухие. Лечение, главным образом, симптоматическое и поддерживающее. Поддерживающее питание, антибиотики и кортикостероиды могут дать временное облегчение клинических симптомов, но болезнь неизменно будет прогрессировать. В 2004 был опубликован отчет, описывавший использование для лечения кошачьего инфекционного перитонита рекомбинантного кошачьего интерферона и глюкокортикоидов. Терапия проводилась над двенадцатью больными кошками. Четыре кошки быстро умерли, четыре показали частичную ремиссию (прожили от двух до пяти месяцев), и четыре кошки показали полную ремиссию (прожили более 2 лет). Все четыре выжившие кошки были взрослыми (от 6 до 16 лет) - и все страдали мокрыми формами заболевания. Хотя исследование охватывало незначительное количество кошек, результаты были обнадеживающими, демонстрируя очевидный терапевтический эффект в некоторых случаях FIP. Однако, высокая стоимость кошачьего интерферона и малая доступность (только в Японии, Великобритании и странах ЕС) препятствуют применению этого метода лечения кошек. Почти всех кошек с диагнозом FIP усыпляют, чтобы облегчить их страдания. С точки зрения опасности заражения можно предположить, что иногда возможна прямая передача FIP-коронавируса, так как были сообщения о вспышках FIP в отдельных колониях кошек. Однако, вирус FIP по-видимому, обычно не передается в природе и умирает после смерти заболевшей кошки.
Профилактика кошачьего инфекционного перитонита.
Так как вирус, вызывающий кошачий инфекционный перитонит является мутацией широко распространенного вируса, профилактика заболевания сопряжена с определенными трудностями. Наиболее эффективной стратегией является профилактика и борьба с наиболее распространенными инфекциями FCoV. Чтобы не допустить перитонита у кошек в домашних условиях, не следует брать котенка из питомников с большим количеством кошек. Лучше всего, если котенок родился в доме, где кошка всего одна. Брать нужно здорового котенка от здоровой кошки. В доме, где кошек мало - одна-две заболевание кошачьим инфекционным перитонитом маловероятно.
В питомниках, бороться с FIP нужно за счет снижения заболеваемости инфекциями FCoV, стараясь полностью искоренить инфекции FCoV среди кошек. На искоренение инфекции, однако, потребуется много времени и кропотливого труда. Содержание питомника без FCoV также будет достаточно сложной задачей, учитывая повсеместный характер инфекций коронавирусов. Более реалистичным является подход, заключающийся в предотвращении заражения котят, родившихся в окружающей среде, где присутствуют вирусы. Если беременную кошку изолировать от других за одну-две недели до родов, сохраняя карантин после рождения котят (при этом проводя гигиенические процедуры по предотвращению распространения инфекции), большинство котят не подвергнутся инфекции. Проверка котят на антитела к FCoV, прежде чем их отнимают от груди, даст неверный результат, так как котята получают свои антитела от матери. Положительный результат лишь подтвердит, что мать подвергалась FCoV. После отъема от груди котят следует содержать отдельно, до 12 - 16-недельного, после чего проверить на антитела к FCoV. Если результат будет отрицательным, значит, процедура изоляции была успешной. У котят в теле нет коронавирусов FCoV, и, теоретически, у них невозможно развитие FIP. Изоляция иногда не дает результата - это происходит в том случае, если кошка сама является носителем FCoV и передает его котятам. В такой ситуации котят приходится отнимать от груди рано (в 5-6-недельном возрасте), антитела против FCoV, полученные с молоком матери предотвратят развитие инфекции. Очевидно, что все эти мероприятия требует значительных усилий со стороны заводчика.
Для минимизации риска FIP очень важна хорошая гигиена. Принимая во внимание, что основным путем распространения вируса считается фекально-оральный, следует придерживаться некоторых простых рекомендаций. Это наличие достаточного количества туалетных лотков (в идеале, по одному для каждой кошки), располагать их отдельно от места, где находится пища и вода, и постоянно поддерживать их в чистоте. Фекалии должны удаляться ежедневно, наполнитель вовремя заменяться. Кошки должны жить в одиночестве или малыми стабильными группами. Поддержание шерсти в чистоте (особенно у длинношерстных кошек) позволит удалять из нее следы фекалий или мусора.
В настоящее время на рынке доступны вакцины против кошачьего инфекционного перитонита, однако их использование вызывает споры. Вакцина закапывается кошке через нос. Различные исследования вакцин дают крайне противоречивую информацию, поэтому их эффективность остается под вопросом. Американская Ассоциация Фелинологов-Практиков (The American Association of Feline Practitioners) и Академия Фелинологической Медицины (Academy of Feline Medicine), в своих регулярно публикуемых рекомендациях по вакцинации кошек, пока не поддерживают применение вакцины.

Диагностика коронавирусной инфекции методом полимеразной цепной реакции (ПЦР)

Версия для печати
Коронавирусные инфекции кошек и собак вызываются представителями рода Coronavirus (семейство Coronaviridae). Основным проявлением коронавирусной инфекции у собак является диарея. V кошек коронавирусы вызывают энтериты и инфекционный перитонит, широко распространенные среди диких и домашних кошек.


Возбудителем коронавирусной инфекции у собак является Canine coronavirus, вызывающий острый коронавирусный энтерит. Заболевание передается при непосредственном контакте с носителем вируса (через слюну и фекалии). Данной инфекции подвержены собаки любого возраста, однако чаще всего поражаются щенки и ослабленные животные, которые уже перенесли другую болезнь, например парвовирусную инфекцию.

Основные симптомы заболевания — рвота и диарея, иногда с примесью крови, обезвоживание организма, потеря в весе, апатия. Через 3-4 недели после выздоровления может развиться повторное заболевание. При проведении диагностики коронавирусный энтерит собак необходимо дифференцировать от парвовирусного энтерита, аденовирусной инфекции кишечного типа и чумы плотоядных.

Коронавирусы, поражающие кошек, представлены двумя биотипами: FECV, или коронавирус энтерита кошек, и FIPV — вирус инфекционного перитонита кошек (2, 3). Носителями FECV является 16-50% домашних кошек, у которых вирус локализуется в тонком кишечнике, не вызывая заболевания или становясь причиной легкой диареи. В то же время у 5-12% носителей может наблюдаться мутация условно-патогенной кишечной формы FECV в патогенную (FIPV), что приводит к развитию болезни (2).

Инфекционный перитонит (ИП, FIP) кошек, заканчивающийся, как правило, летально, протекает в двух формах — влажной и сухой. Влажная (экссудативная) форма ИП характеризуется поражением кровеносных сосудов брюшной или грудной полостей, сопровождающимся выпотеванием плазмы в указанные полости (рис. 1). У больных животных, развивается асцит (рис. 2), а в случае скопления жидкости — нарушение функции дыхания. На серозных покровах органов брюшной полости формируются фибринозные наложения (рис. 3), в дальнейшем могут образовываться спайки. Вследствие нарушения функции печени наблюдается эктеричность склер и кожных покровов.
Сухая (неэкссудативная) форма ИП протекает без скопления жидкости в брюшной и грудной полостях. В этом случае страдают внутренние органы — головной мозг (рис. 4), печень, почки, поджелудочная железа, в 25% случаев наблюдаются поражения глаз (рис. 5) (5).

Поскольку эффективная схема лечения ИП пока не разработана, первостепенное значение имеют профилактические меры, направленные на раннее выявление вирусоносительства (1, 3).

Диагностика инфекционного перитонита кошек также представляет серьезную проблему. Традиционные методы выявления возбудителя, основанные на обнаружении антител к коронавирусам (РНГАи ИФА), дают до 60% ложноположительных результатов. Это обусловлено присутствием в кишечнике кошек условно-патогенных штаммов возбудителя (2, 3). В ряде зарубежных лабораторий применяется комплексная методика диагностики ИП, включающая определение:
— титра антител к коронавирусу;
— соотношения альбуминов/глобулинов в транссудате или плазме крови;
— уровня а-1 кислого гликопро-теина (AGP);
— цитологических и гематологических показателей (4).

Материалы и методы
В исследовании был использован штамм коронавируса «Багира» (5 1оg ТЦД50/мл) в разведениях, 8 изолятов коронавирусов кошек (FCoV), 2 изолята коронавируса собак (CCV) и суспензии вируса панлейкопении кошек и калицивируса кошек.
При испытании ПЦР-тест-системы использовался биологический материал здоровых кошек, животных с клиническими признаками ИП и кошек с неспецифическими симптомами. Среди исследованных животных были как содержащиеся в питомниках, так и находящиеся на индивидуальном содержании.
Биологический материал параллельно исследовался методами ПЦР и РИГА. С помощью ПЦР-системы исследовались фекалии, плазма крови, транссудат при специфическом асците, а методом РИГА — сыворотка крови и транссудат.

Серологические тесты проводились с использованием набора для выявления антител к коронавирусам плотоядных в РИГА (ТУ 9388-025-00494189-01). Биологический материал собак исследовался методом ПЦР.

Однако данное исследование требует значительных затрат времени и средств. В связи с этим эффективным методом диагностики ИП может служить полимеразная цепная реакция (ПЦР), которая позволяет не только выявлять коронавирусы кошек, но и проводить дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов исходя из различной локализации их в организме. При этом обнаружение вируса в фекалиях кошек свидетельствует о носительстве условно-патогенных штаммов (FECV), а в плазме крови или асцитной жидкости — о циркуляции в организме животного патогенных штаммов (FIPV) и, следовательно, о заболевании.

Цель настоящего исследования — испытание тест-системы для диагностики коронавирусной инфекции у кошек и собак на основе ПЦР.

Выделение РНК проводилось с использованием набора «РНК-сорб» (ЦНИИЭ), в основе которого лежит метод ее сорбции на силикагеле. ПЦР проводилась на амплификаторе ТЕРЦИК («ДНК-технология») по стандартной методике. Полученные ПЦР-продукты визуализировались методом электрофореза в 1,5% агарозном геле, содержащем бромистый этидий.

Результаты и обсуждение
В процессе исследования проведен анализ сведений о нуклеотидных последовательностях представителей семейства Coronaviridae, в частности различных изолятов коронавирусов кошек и собак, опубликованных в базах данных Entrez, GeneBank, EMBL и DDBJ. Кроме того, изучена литература, характеризующая структуру геномов FCoV, CCV и их генетическое родство с другими представителями семейства.

В качестве мишеней для специфических праймеров были выбраны две консервативные последовательности в гене нуклеокапсидного протеина. Специфичность предложенных праймеров изучалась с помощью компьютерных программ FASTA и BLASTA. В результате проведенной работы была выявлена гомология выбранных олигонуклеотидов только с генами нуклеокапсидного протеина FCoV и CCV и не обнаружено их значимой гомологии с нуклеотидными последовательностями иных видов семейства Coronaviridae, а также каких-либо других вирусов, бактерий или эукариот. Таким образом, предложенные праймеры, исходя из теоретических расчетов, должны обладать 100% специфичностью.

На следующем этапе исследования были оптимизированы условия выделения РНК вируса и проведения реакции обратной транскрипции и ПЦР, а также определены специфичность и чувствительность ПЦР-анализа. Размер ПЦР-продукта составил 350 пар нуклеотидов. Метод показал 100% специфичность и высокую чувствительность. Обнаружение коронавируса в фекалиях кошек свидетельствовало о носительстве его условно-патогенных штаммов в кишечнике, обнаружение FECV в транссудате и плазме крови — о развитии заболевания.

При исследовании методом РНГА положительным результатом считалось обнаружение у животного титра антител > 1:128. Однако это могло указывать как на вирусоносительство, так и на манифестированную форму инфекции. Кроме того, положительный титр мог быть обусловлен наличием контакта с коронавирусом ранее. В качестве материала от собак исследовались фекалии, и обнаружение в них РНК коронавируса свидетельствовало о заболевании, вызванном CCV.

В ходе эксперимента был исследован биологический материал, взятый у 193 кошек (таблица). Методом РНГА положительный результат был зафиксирован у 131 животного (титры антител > 1:128). При тестировании «сероположительных» кошек методом ПЦР РНК коронавируса была обнаружена в плазме и асцитной жидкости у 12 животных (9%), только в фекалиях - у 68 (52%) и у 51 (39%) - не обнаружена вовсе. Таким образом, 52% кошек с серопозитивным результатом являлись носителями условно-патогенных штаммов коронавируса, а 39% были здоровы. Очевидно, что исследование методом РНГА дало 63% ложноположительньгх результатов (в пересчете на общее количество исследованных животных).

Заключение
Полученные результаты свидетельствуют о том, что диагностика коронавирусной инфекции кошек традиционным серологическим методом (РНГА) дает более 60% ложноположительных результатов, поскольку не позволяет дифференцировать состояние носительства от истинного заболевания. Кроме того, "сероположительными» считались животные, имевшие контакт с коронавирусом ранее.

Использование метода ПЦР позволило провести дифференциацию условно-патогенных и патогенных штаммов в связи с их раз личной локализацией в организме и отличить состояние носительства от заболевания. Таким образом, данные проведенного исследования говорят о целесообразности использования метода ПЦР для выявления коронавирусов кошек и собак и постановки окончательного диагноза.

В соответствии с приказом № 45 Департамента ветеринарии МСХ РФ в период с 03.08.2004 г. по 06.08.2004 г. были проведены комиссионные испытания тест-системы для диагностики инфекционного перитонита кошек методом ПЦР. Тест-система успешно прошла комиссионную апробацию, показав 100% специфичность и высокую чувствительность в рамках предложенной панели. В настоящее время тест-система «Коронавир» для выявления и идентификации коронавирусов кошек и собак, основанная на ПЦР, успешно используется в ветеринарной практике (ТУ 9388-142-00494189-05; РУ № Р077-1-3.5-0813 зарегистрирована в РФ за № ПВР-1-3.5/01556 от 30.06.06 г. сроком на 5 лет).

ЛИТЕРАТУРА
1, Addie, D, D„ Jarrett, 0. Use of a reverse- transcriptase polymerase chain reaction for monitoring the shedding of feline coronavirus by healthy cats, Vet. Rec, 2001, May 26; 148 (21): 649-53,
2, Vennema, H, atal. Feline Infectious Peritonitis Viruses Arise by Mutation from Endemic Feline Enteric Coronaviruses, Virology, 1998:150-157.
3, Herrewegh, A.A., Mahler, M„ Hedrich, H.J., Haagmans, B.L Egberink, H.F., Horzinek, M.C., Rottier, P.J., de Groot, R,J, Persistence and evolution of feline coronavirus in a closed cat-breeding colony Virology 1997, Aug 4; 234 (2): 349-363,
4, Comparison of Different Tests to Diagnose Feline Infectious Peritonitis; Katrin Hartmann at al„ 2003.
5, Feline infectious peritonitis; Stacy E, Andrew, Veterinary clinics of North America: small animal; vol. 30, number 5, September 2000



Е.А. ЯРАЛОВА, И.Л. ОБУХОВ, ММ РАХМАНИНА, Э.И. ЭЛИЗБАРАШВИЛИ, В.И.УЛАСОВ,
Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов, г. Москва

Те же авторы:
Иммуноферментный метод выявления антител к коронавирусу для диагностики инфекционного перитонита кошек